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食品安全綜合檢測儀幫助您進行定性分析和定量分析,
一、定性分析
在**液相色譜中,常用的定性分析有下列五種方法。
1.利用已知標準樣定性
由于每一種化合物在特定的色譜條件下有其特定的保留值,如果在相同的色譜條件下,被測物與標樣的保留值相同,則可初步認為被測物與標樣相同。
2.利用紫外和熒光光譜定性
由于不同的化合物有其不同的紫外吸收或熒光光譜,對檢測池中的待檢樣品進行全波長(180~800nm)掃描,得到紫外可見光或熒光光譜圖;再用相應(yīng)標準品,按同樣方法處理,也得到一個光譜圖,比較這兩張圖譜,即可鑒別該樣品是否與標準品相同。對于某些有特征光譜圖的化合物,也可以與所發(fā)的標準圖譜來比較以進行定性。
3.收集柱后流出組分,再用其他化學或物理方法定性
液相色譜常用化學檢測器,被測物經(jīng)過檢測器后不受破壞,所以可以收集各組分,然后再用紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振等方法進行鑒定。
4. HPLC指紋圖譜分析法
HPLC指紋圖譜分析法是指紋圖譜與HPLC相結(jié)合的一種分析方法,目前已成為中藥質(zhì)量控制的**方法,適用于中藥復(fù)雜成分的分離、分析和指紋圖譜的建立。在食品上主要用于天然成分的分析。被分離、分析物質(zhì)預(yù)處理后用HPLC測定出色譜峰,經(jīng)過計算機庫存信號的檢索及對質(zhì)譜圖的解析,對所含成分做出定性鑒定。
5.建立液相色譜定性方法
可根據(jù)以下幾點,建立合理的液相色譜分析方法:選擇合適的分析樣品的液相色譜方法;選擇合適的柱子;選擇合適的k(峰容量因子)的條件;確定良好的峰位(α);選擇良好的柱條件(**N值)。 根據(jù)樣品的情況,如分子量是大于2000還是小于2000,樣品是溶于水還是不溶于水,確定選擇何種液相方法。液相色譜方法的選擇 選擇溶劑強度配成適宜的流動相,以得到理想的k,使k盡量在1~10的范圍內(nèi)(特殊情況也允許0.5二、定量分析 在**液相色譜分析中常用的定量分析方法有外標法和內(nèi)標法。
1.外標法
外標法是以被測化合物的純品或已知其含量的標樣作為標準品,配成一定濃度的標準系列溶液,注入色譜儀,得到的響應(yīng)值(峰高或峰面積)與進樣量在一定范圍內(nèi)成正比。用標樣濃度對響應(yīng)值繪制標準曲線或計算回歸方程,然后用被測物的響應(yīng)值求出被測物的量。
2.內(nèi)標法
內(nèi)標法是在樣品中加入一定量的某一物質(zhì)作為內(nèi)標進行的色譜分析,被測物的響應(yīng)值與內(nèi)標物的響應(yīng)值之比是恒定的,此比值不隨進樣體積或操作期間所配制的溶液濃度的變化而變化,因此可得到較準確的分析結(jié)果。 具體操作步驟如下。 (1)先準確稱取被測組分a的標樣Wa內(nèi)標物,加入一定量溶劑混合,即得混合標樣。取任意體積(μL)注入色譜儀,得色譜峰面積Aa(被測組分a標樣峰面積)及峰面積As(內(nèi)標物峰面積),用式計算相對響應(yīng)因子Sa。(2)稱取被測物W,然后加入準確稱重的內(nèi)標物W's,加入一定體積的溶劑混合。取任意體積(μL)注入色譜儀,測得被測組分a的峰面積A'a,內(nèi)標物峰面積為A's。按式計算被測物中a組分的質(zhì)量W'a。
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